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          采用高架十字迷宮實驗、曠場實驗觀察大鼠行為學變化
          點擊次數:1751 更新時間:2019-10-08

          基于“病證結合”理論探討廣泛性焦慮心陰
          虧虛證大鼠模型的構建與評價

           

          摘要:目的:基于“病證結合”理論,構建和評價廣泛性焦慮(generalized anxiety disorder, GAD)心陰虧虛證 大鼠模型。方法:按隨機數字表法將32只SD大鼠隨機分為4組,每組8只,即空白組、模型組、天王補心丸組、di西泮片組。根據先疾病后證型的思路進行造模,除空白組外,其余3組大鼠通過不確定性空瓶應激法先建立 GAD模型,再采用水環境小站臺睡眠剝奪法形成大鼠心陰虧虛證候模型,以此構建GAD心陰虧虛證模型。造模 成功后,空白組和模型組不給與任何處理,天王補心丸組、di西泮片組分別給予天王補心丸、di西泮片灌胃,1次/ d,連續干預21 d。從宏觀表征、微觀指標、以方驗證三個方面對模型進行評價。每日觀察大鼠一般情況。造模 前、造模后及干預第1、2、3周末采用高架十字迷宮實驗、曠場實驗觀察大鼠行為學變化。造模前、造模后及干預 第3周末檢測大鼠收縮壓、心率、呼吸、肛溫水平。干預第3周末采用實時熒光定量聚合酶鏈式反應法(real - time PCR)檢測大鼠海馬GR mRNA表達水平。結果:(1)宏觀表征:①行為學結果顯示:與空白組比較,造模后、 造模后1周、造模后2周、造模后3周模型組OE%值、OT%值、水平運動、垂直運動均降低(P <0. 05)。②生命體 征結果顯示:與空白組比較,造模后、造模后3周模型組收縮壓均較低P<0. 01);心率、呼吸、肛溫均較高P< 0.01)。(2)微觀指標:RT-PCR結果顯示:造模后3周,與空白組比較,模型組大鼠海馬GR mRNA表達水平降 低(P <0. 01)。(3)以方驗證:①行為學結果:與模型組比較,天王補心丸組、di西泮片組干預后各時間點OE%值、OT%值、水平運動、垂直運動均升高P<0. 05);di西泮片組干預后各時間點OE%值、干預第1、周末OT%值、水平運動和干預第1、周末垂直運動均升高(P <0. 01)。②生命體征結果:干預第3周末,與模型組比較,天 王補心丸組、di西泮片組收縮壓均升高(P <0. 05),心率、呼吸、肛溫均降低(P <0. 05)。③RT - PCR結果:干預 第3周末,與模型組比較,天王補心丸組、di西泮片組大鼠海馬GR mRNA表達水平均升高(P <0. 05)。結論:采 用不確定性空瓶應激法結合水環境小站臺睡眠剝奪法成功構建了 GAD心陰虧虛病證結合模型,該模型較為穩 定,可控性相對較強,值得進一步應用。

          關鍵詞:廣泛性焦慮;心陰虧虛;病證結合;模型

          廣泛性焦慮癥GAD)是常見的焦慮癥類型,以泛化 或持續存在的焦慮為主要臨床表現,常伴有自主神經功能 紊亂及運動不安的癥狀1。中醫學認為心脾兩虛、肝郁化 火和心腎不交是GAD的主要證型2。隨著現代生活節奏 的加快,工作生活壓力的加大,GAD證型逐步由肝郁化火 向心陰虧虛轉變3。近年來,眾多學者4-6聚焦于中醫藥 治療GAD的多靶點整體作用優勢,相繼報道了中藥、針灸、 推拿等對GAD的治療效果。但是,關于中醫藥治療GAD 的具體作用機制仍不清楚7。中醫診療講究對疾病進行 辨證論治,但目前關于GAD的病證結合動物模型還不夠成 熟,由于缺乏機制研究的載體,所以影響了 GAD的中醫應 用基礎研究進步開展8。因此,建立穩定的、可重復的、 符合中醫病因bin機的GAD病證結合動物模型十分必要。 病證結合既是一種理論,也是一種方法,體現了現代中醫 “據病言證,究證言法,法隨證立,方證相應”的診療思 路9。病證結合動物模型[10 ,是基于中醫藥理論指導,結 合現代醫學理論與實驗動物科學知識,采用中醫學病因復 制證候動物模型,通過現代醫學病因復制疾病動物模型,令 模型同時具有疾病與證候特征的一類造模方法。本研究根 據病證結合理論,采用不確定性空瓶應激法[11]建立GAD 疾病模型,結合水環境小站臺睡眠剝奪法[12造成心陰虧虛 證候模型,終構建了 GAD心陰虧虛病證結合模型,并從 宏觀表征、微觀指標、以方驗證(天王補心丸三個角度評 價了該模型

          結果顯示:①行為學:與模型組比較,天王補心丸組、di西泮片組干預后各時間點OE%值、OT%值、水平運動、垂 直運動均升高P< 〇.〇5);di西泮片組干預后各時間點 OE%值、干預第1、周末OT%值、各時間點水平運動和干 預第1、周末垂直運動均升高P<0. 01)。②生命體征: 干預第3周末,與模型組比較,天王補心丸組、di西泮片組 收縮壓均升高(P < 0. 05),心率、呼吸、肛溫均降低(P < 0. 05)。③RT - PCR:干預第3周末,與模型組比較,天王補 心丸組、di西泮片組大鼠海馬GR mRNA表達水平均升高 (P <0.05)。結果說明天王補心丸明顯改善了模型中GAD 心陰虧虛大鼠的焦慮癥狀及心陰虧虛狀況。中醫學有‘‘方 證相應”之說,方證相應強調了方劑與其作用對象之間的 相互作用,即方劑的功用是特定方藥與其作用對象特定證 之間相互作用的結果26 ,故通過‘‘以方驗證”的方式可以 反證證候模型是否構建成功。天王補心丸為中醫經典名 方,具有滋陰養血、補心安神等功效,主要用于心陰不足,心 悸健忘,失眠多夢等癥,是治療GAD心陰虧虛證的代表性 方藥27-28。已有臨床研究29證實,采用天王補心湯治療 心陰不足型GAD可以達到和西藥同樣的抗焦慮效果。本 研究結果表明天王補心丸對GAD心陰虧虛大鼠的焦慮行 為及心陰虧虛表現均有明顯改善作用。故從‘‘方證相關, 以方驗證”的評價角度證實了本實驗模型的穩定性和可靠 性。同時,本研究結果也說明了天王補心丸在干預治療 GAD心陰虧虛大鼠時,主要通過增加大鼠海馬組織內GR mRNA表達量以發揮抗焦慮作用。由此可知,病證方藥緊 密聯系,病證結合、方證相應,天王補心丸切實地對GAD心 陰虧虛大鼠病證結合模型進行了驗證和評價。

          5結論

          本研究采用不確定性空瓶應激法結合水環境小站臺睡 眠剝奪法構建了 GAD心陰虧虛病證結合模型,并且從宏觀 表征、微觀指標、以方驗證(天王補心丸)3個角度對模型進 行了評價。結果表明,模型穩定、相對可控、造模理念符合 中醫病因bin機,值得推廣應用。受實驗條件限制,本模型的 微觀指標相對較少,有待進一步研究。

           

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